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單細胞凝膠熒光檢測細胞凋亡

點擊次數(shù):1289 更新時間:2016-08-08

以來人們一直認為不同種類的抗生素通過結(jié)合不同的作用靶點和各異的作用機制發(fā)揮殺菌作用。如 β-內(nèi)酰胺類抗生素在單細胞凝膠電泳分析(SCGE)是在單細胞水平進行DNA損傷和修復檢測的熒光檢測方法,具有簡單、快速、靈敏和原位等特點。因其細胞電泳形狀頗似彗星,又稱彗星試驗(comet Etssay)。

低熔點瓊脂糖凝膠將細胞包埋于載玻片上,細胞裂解液破壞細胞膜、核膜及其他生物膜,細胞內(nèi)RNA、蛋白質(zhì)及其他成分進入凝膠,繼而擴散至裂解液中,而核DNA仍原位附著于核骨架。如果細胞未受損傷,因核DNA分子量大,電泳中停留于原位,經(jīng)熒光染色后呈現(xiàn)圓形的熒光團,無拖尾現(xiàn)象。

若細胞受損,在堿性電泳液(pH>13)中,DNA雙鏈解螺旋且堿變性為單鏈,單鏈斷裂的小分子量DNA碎片進入凝膠,向陽極遷移,形成拖尾。細胞核DNA損傷愈嚴重,產(chǎn)生的斷鏈或堿變性片段愈多,其片段愈??;電場作用下遷移的DNA量多,遷移的距離長,熒光顯微鏡下可觀察到尾長增加和尾部熒光強度增強。一定條件下,DNA遷移距離(彗星尾長)和DNA古量(熒光強度)分布與DNA損傷程度呈線性相關(guān)。

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