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維生素AElisa試劑盒使用需要留意的事項

點擊次數(shù):731 更新時間:2023-02-13

  維生素AElisa試劑盒運用雙抗體夾心ELISA法定量測定其他血清、血漿、組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清液和其他生物液體中維生素A(VA)ELISA試劑盒含量。實驗原理:將維生素A(VA)抗體包被于96孔微孔板中,制成固相載體,向微孔中分別加入標準品或標本,其中的維生素A(VA)與連接于固相載體上的抗體結(jié)合,然后加入生物*化的維生素A(VA)抗體,將未結(jié)合的生物*化抗體洗凈后,加入HRP標記的親和素,再次洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,井在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的維生素A(VA)呈正相關(guān)。
  維生素AElisa試劑盒使用注意事項:
  1.試劑準備:準備一次實驗所需要的酶標條,其它的可從微孔板上拆下,密封,按照說明書要求保存,以備下次使用。
  2.加樣:實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。加樣時注意不要有氣泡,將樣品加于酶標板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。加樣或加試劑時,個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的“預溫育”時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。因此,一次加樣時間好控制在十分鐘內(nèi)。
  3.溫育:為防止樣品蒸發(fā),實驗時請將加上蓋或覆膜的酶標板置于濕盒內(nèi),以避免液體蒸發(fā),洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài),同時應嚴格遵守給定的溫育時間和溫度。
  4.洗滌: 充分的洗滌非常重要,在每次洗滌過程中,都要將洗滌液甩干。洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上拍干,勿將濾紙直接放入反應孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響*后的酶標儀讀數(shù)。如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
  5.反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化,如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應,避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
  6. 底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光自接照射。
  7.如果實驗室內(nèi)濕度低于60%,推薦使用加濕器提高濕度水平。
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